ساختارلوله سانتریفیوژ اولترافیلتراسیون
درپوش لوله سانتریفیوژ، بدنه لوله + فیلتر (لوله داخلی اولترافیلتراسیون)
انتخاب لوله های سانتریفیوژ فیلتر
1. با توجه به جدول سازگاری شیمیایی ارائه شده توسط سازنده، تعیین کنید که آیا نمونه مورد پردازش می تواند از لوله سانتریفیوژ اولترافیلتراسیون استفاده کند. لوله های سانتریفیوژ اولترافیلتراسیون برای مایعات بیولوژیکی و محلول های آبی مناسب هستند.
2. مشخصات ظرفیت لوله سانتریفیوژ اولترافیلتراسیون را با توجه به مقدار نمونه مورد پردازش انتخاب کنید. موارد رایج عبارتند از: 0.5mL، 4mL، و 15mL.
3. یک غشای فیلتر را بر اساس بریدگی وزن مولکولی نمونه مورد پردازش انتخاب کنید. هنگام انتخاب، به انتخاب غشای فیلتری توجه کنید که سه برابر یا بیشتر از وزن مولکولی املاح نمونه کوچکتر باشد تا اثر ماندگاری بهتری به دست آید. انتخاب ها برای قطع وزن مولکولی عبارتند از: 5KD، 10KD، 30KD. ,50KD,100KD.
4. پس از تعیین مشخصاتی که باید انتخاب کنید، می توانید آزمایش را شروع کنید.
استفاده ازلوله های سانتریفیوژ اولترافیلتراسیون
پیش تمیز کردن: ممکن است گلیسرول یا عوامل محافظ در طول تولید لوله های سانتریفیوژ اولترافیلتراسیون وجود داشته باشد، بنابراین قبل از استفاده آنها را با فیلتر کردن 15 میلی لیتر آب دیونیزه یا بافر از طریق غشاء و تکرار آن جدا کنید. در صورت نیاز به شستشوی بیشتر، با 0.05N NaOH شروع کنید و این فرآیند را تکرار کنید. هنگامی که یک فیلتر گریز از مرکز خیس شد، باید تا زمانی که از آن استفاده شود مرطوب بماند.
1. درب را بردارید، بیش از 15 میلی لیتر از نمونه را به چاه نمونه منتقل نکنید و درب را ببندید تا از تبخیر در حین سانتریفیوژ جلوگیری شود.
2. فیلتر را در یک سانتریفیوژ قرار دهید که می تواند یک لوله مخروطی 50 میلی لیتری را در خود جای دهد. همیشه روتور را با فیلتر سانتریفیوژ دیگری که حجم نمونه برابری دارد متعادل کنید.
3. زمان مورد نیاز سانتریفیوژ توصیه شده را مصرف کنید. اولترافیلتراسیون: برای دستیابی به حجم غلظت مورد نظر، با سرعت 1،{2}} تا 5،000 xg، معمولاً به مدت 20 تا 60 دقیقه بچرخانید. تعیین زمان چرخش و گرانش برای هر کاربرد توصیه می شود.
4. برای بازیابی املاح غلیظ، یک پیپت را در پایین دستگاه فیلتر قرار دهید و نمونه را در حالی که آن را از سمتی به سمت دیگر تکان می دهید، لوله کنید تا از بازیابی کامل اطمینان حاصل کنید. اولترافیلترات را می توان در لوله های سانتریفیوژ ذخیره کرد.
توجه: برای دستیابی به بازیابی ایده آل، لطفاً نمونه غلیظ را بلافاصله پس از سانتریفیوژ بردارید.
محدوده کاربرد لوله های سانتریفیوژ اولترافیلتراسیون
آ. پروتئین های کنسانتره و نمک زدایی و اسیدهای نوکلئیک (DNA یا RNA)
ب تبادل بافر یا نمک زدایی اجزای کروماتوگرافی
ج بیومولکول ها را از محیط کشت برداشت کنید
د غلظت یا جداسازی ویروس
ه. جداسازی خشن مخلوط های بیومولکول
f. حذف باقی مانده ها و ذرات از لیزات سلولی
g. پرایمرها، آداپتورها یا نشانگرهای مولکولی را از مخلوط واکنش حذف کنید (معمول در واکنش های PCR)
سرعت فیلتراسیون لوله سانتریفیوژ اولترافیلتراسیون
عواملی که بر سرعت فیلتراسیون تأثیر می گذارند عبارتند از: غلظت نمونه، حجم اولیه، خواص شیمیایی املاح، نیروی گریز از مرکز نسبی،
زاویه روتور گریز از مرکز، نوع غشای فیلتر، منطقه و دمای فیلتراسیون موثر و غیره.
به طور کلی، سازندگان نمودارهای نقطه و خط زمان سانتریفیوژ، حجم مایع، رهگیری مولکولی و غیره را به عنوان مرجع برای سانتریفیوژ ارائه می کنند. آنها به طور جداگانه با توجه به روتورهای افقی یا روتورهای زاویه ثابت نمایش داده می شوند. زمان سانتریفیوژ مورد نیاز را می توان بر اساس جدول داده ها بهتر تعیین کرد. .